实验步骤
实验材料:细胞样品
实验仪器与耗材:6 孔板、marker 笔、直尺、枪头
实验试剂:无血清培养基、PBS
实验流程:
1) 铺板:处于对数生长期的细胞,胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于6孔培养板;细胞铺板6*105个细胞/孔,确保第二天细胞能够长满,每孔*终的培养基总量2mL;
2) 细胞培养:37℃、5%CO2培养箱中培养24h;
3) 划痕:第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间*好使用同一只枪头),每孔划三道;
4) 清洗:PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基;
5) 拍照:4倍镜下进行拍照,保证划痕居中且垂直,注意背景一致,可按0,6,12,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定);
6) 数据分析
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